截留分子量選小啦！看到這個表，你是否發現原來抱怨Millipore超濾管流速偏慢的根源來自對于Millipore截留分子量定義的誤解。膜孔徑要小于目的分子這是第一原則。如果分子有近似球形的立體結構(而非明顯的線性分子)，在Millipore再生纖維素超濾膜體系內，選擇“等于"或“略小于"目的分子的截留分子量的超濾管是zui選擇，這樣操作起來又快又好，既保證了樣品回收率，又縮短了離心時間，大幅降低大分子損傷風險。

Amicon® Ultra系列超濾管產品需要根據起始樣品體積、目標蛋白或核酸的分子量、終體積及濃縮倍數等選擇具體型號。下表為選擇適合截留分子量的超濾管提供了一些參考建議。

收取體積已經很小的濃縮好的樣品時，你會：

A 購買最尖細的槍頭，把樣品吸回來 

B 濃縮倍數低一點，以便用槍頭把樣品吸回來

C 反轉離心回收，獲得最高得率

正確答案“C",你答對了么？
Millipore的Amicon® Ultra系列超濾管上樣體積有0.5/2/4/15/70mL等五種，除了采用低吸附的管材和低蛋白吸附的再生纖維素超濾膜，其中0.5mL，2mL和70mL的規格還特別設計了反轉回收模式，以便使已經濃縮的樣品回收。

現在你總該知道為什么收到AU0.5的時候會有兩個外管了吧～

更多關于超濾管的正確使用問題：

• 蛋白在濃縮時出現了沉淀，如何改進？

  蛋白如果濃縮過快或者過度濃縮都有可能引起蛋白沉淀。建議蛋白濃縮后的最終濃度不超過20mg/ml。對于對濃縮速度敏感而容易沉淀的蛋白，建議的改進方法是：

  1）離心力降為推薦離心力的30%-50%

  2）改用截留分子量更大的超濾管（如原本選用10k，此時可以選擇30k） 

  3）在濃縮過程中取出超濾管，用槍頭反復吹吸幾次后再繼續濃縮

  4）體積較大的樣品可考慮選用攪拌式超濾杯，減少沉淀的發生。

• Amicon® Ultra超濾管可以用酒精消毒滅菌么？

  Amicon® Ultra與70%乙醇是兼容的，但是對滅菌處理的具體方法沒有做相關的測試，所以無法提供更進一步的參考信息。建議采用Ultrafree無菌離心管對濃縮后的樣品進行過濾除菌。

• Amicon® Ultra超濾裝置是否可以用于高壓滅菌？

  Amicon® Ultra都是采用熱封設計，不可以用高壓高溫滅菌。

• 懷疑濃縮過程中目的蛋白和超濾膜之間可能存在非特異性吸附，如何改善？ 

  Amicon® Ultra超濾管使用的是再生纖維素膜，這種材質是蛋白吸附的超濾膜。但是對于一些疏水性蛋白或非極性蛋白，它們和膜的非特異吸附可能會增強。對于這種情況，可以嘗試在實驗前對超濾管進行封閉處理，也可以嘗試換成Amicon® Ultra 0.5或2來進行實驗，通過減小膜面積來降低非特異性吸附。

• 有時候用超濾離心管連水都離不下來，可能是什么原因？

  Amicon® Ultra超濾膜中含有微量甘油。如果出現這種情況，請先用0.1 N NaOH清洗再離心。最后用緩沖液或Milli-Q®水再次清洗后甩干。清洗后的濾膜應立即使用，如暫時不用，請保持潤濕狀態，避免重新干燥。

• 如果要用超濾的方法分離兩種蛋白，那么這兩個蛋白的大小需要相差多少？

  按照經驗，建議兩個蛋白的分子量要相差一個數量級（10倍）。

• 說明書中推薦在室溫下進行離心，考慮到蛋白的穩定性，是否可以在4℃進行離心？

  可以，但是低溫會增加蛋白樣品的粘性，導致流速減慢，建議可將離心時間延長到原來的1.5倍。
  

• 濃縮后發現濃縮液中沒有目的蛋白，可能的原因有哪些？

  首先，Amicon® Ultra超濾管的蛋白zui低起始濃度為25ug/ml。請確保樣本的起始濃度大于這個濃度。其次，如果問題仍然出現，請不要丟棄樣本濾過液以便用于分析可能的原因：

  1）如果目的樣本在濾過液中，那么請排查：

    a） 是否選擇了合適截留分子量的超濾管（目的蛋白分子量的1/2或者1/3）？

    b）使用的離心力是否是在限定范圍內？如果使用的是rpm，請換算成相應的g離心力，具體換算方法請垂詢。

    c）離心機最近是否有校準過？

    d）是否嘗試這個蛋白？如果能確保用同樣的超濾管對其它蛋白成功操作的話，那么有可能是這個目的蛋白的原因。有時蛋白會因其本身的一些特性（構象差異）而影響濃縮效果，建議選用更小截留分子量的超濾管（如原本選用30k，此時可以選擇10k）

  2）如果目的樣本也不在濾過液中，那么：

    a）蛋白樣本起始濃度是否大于25ug/mL？

    b）用來確定樣本濃度的方法是什么？是否可信？

    c）目的蛋白是不是沉淀了？如果是，具體解決方法請參考上面的關于蛋白沉淀問題的解釋。